GenSolve é um kit robusto para extração de alta qualidade, alto rendimento de DNA dupla fita preservado em GenPlates®, papel FTA, cartões Guthrie e todos os filtros de papel. Existem métodos genéricos de extração de DNA de matriz de celulose que incluem condições alcalinas, e aquecimento, ambos os quais resultam na recuperação de DNA fita simples; digestão de restrição ou extrações orgânicas rendem DNA dupla fita mas requerem um esforço intensivo.
A Tecnologia FTA® é uma maneira fácil e rápida de coletar DNA de uma variedade de amostras biológicas. Sangue, células bucais, plantas, bactérias e muitos outros tipos de amostra são aplicados a cartões FTA onde as células são instantaneamente lisadas e o DNA é capturado na matriz de celulose. Após secagem, as amostras ficam estáveis e prontas para o armazenamento a longo prazo.
GenSolve recupera a mesma alta qualidade do DNA dupla fita do papel FTA, papel de filtro padrão ou cartões Guthrie, e o processo é rápido e fácil. Qualquer possível interferência subsequente pelos químicos FTA é eliminada assim que elas são removidas utilizando o GenSolve. GenSolve também proporciona os mais altos rendimentos de DNA quando comparado a outros protocolos de extração genéricos.
Protocolo Simples e Rápido
O procedimento da GenSolve consiste em incubar discos de FTA de 6mm a 65 °C com uma protease combinada com uma solução de pH alto e dodecil sulfato de lítio 1%. A incubação libera DNA, proteínas e fragmentos celulares da matriz de um modo altamente eficiente. Após a centrifugação o eluído pode ser purificado por um método padrão de ligação-lavagem-eluição para isolar e concentrar o DNA. O processo inteiro da punção ao DNA dupla fita purificado leva menos de 90 minutos.
Desempenho do GenSolve
Rendimento do DNA: GenSolve recupera uma quantidade significante de DNA preso na matriz quando o sangue total é pingado nos cartões FTA. Os rendimentos são entre 50 – 360 ng de 10µl de sangue total. O rendimento varia dependendo da contagem de glóbulos brancos da amostra inicial e da variabilidade normal entre os doadores.
Reprodutibilidade: GenSolve é reproduzível com uma média de CV de 11%. Além dos 90 discos contendo 10µl de sangue total de 30 amostras únicas que foram processadas pelo método GenSolve em triplicata. A % do CV foi calculada a partir do desvio padrão para cada triplicata.
DNA de alto peso molecular: O DNA dupla fita recuperado dos cartões FTA através do método GenSolve é intacto e de aproximadamente 35 kb de comprimento.
Adequação do DNA recuperado pelo GenSolve
O DNA recuperado é comparável ao DNA extraído utilizando métodos tradicionais.
- DNA recuperado do FTA é de alta qualidade cm um MW de aproximadamente 35 kb
- Serve como molde para PCR, qPCR etc
- Pode ser usado em ensaios de genotipagem SNP de discriminação alélica com TagMan
- Fornece 100% de concordância para o mapeamento de 10k de arranjos por GeneChip Human
- Pode ser utilizado na plataforma BeadLab utilizando o GoldenGate Array
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